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噬菌體篩選關(guān)于噬菌體的展示技術(shù)解讀

更新時(shí)間:2020-07-07點(diǎn)擊次數(shù):1188
   噬菌體篩選展示技術(shù)經(jīng)近20年的發(fā)展和完善,已被廣泛應(yīng)用于抗原抗體庫(kù)的建立、藥物設(shè)計(jì)、疫苗研究、病原檢測(cè)、基因治療、抗原表位研究及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究等。噬菌體展示系統(tǒng)模擬了自然免疫系統(tǒng),使我們有可能模擬體內(nèi)抗體生成過(guò)程,構(gòu)建高親和力抗體庫(kù)。由于噬菌體展示技術(shù)實(shí)現(xiàn)了基因型和表型的有效轉(zhuǎn)換,使研究者在基因分子克隆基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)構(gòu)象體外控制,從而為獲取具有良好生物學(xué)活性的表達(dá)產(chǎn)物提供了強(qiáng)有力手段。另外,噬菌體展示技術(shù)已成為不經(jīng)過(guò)免疫獲取特異性人源抗體的新途徑,為獲取對(duì)人類和動(dòng)物疾病有診斷和治療價(jià)值的單克隆抗體提供了重要手段。
  噬菌體展示技術(shù)是將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因插入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置,在閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常功能的情況下,使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達(dá),融合蛋白隨子代噬菌體的重新組裝而展示在噬菌體表面。展示到噬菌體表面的多肽或蛋白保持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性,可以與靶分子結(jié)合和識(shí)別。噬菌體展示的肽庫(kù)或蛋白庫(kù)與固相抗原結(jié)合,洗去未結(jié)合的噬菌體,然后用酸堿或者競(jìng)爭(zhēng)的分子洗脫下結(jié)合的噬菌體,中和后的噬菌體感染大腸桿菌擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)3-5輪的富集,逐步提高可以特異性識(shí)別靶分子的噬菌體比例,終獲得識(shí)別靶分子的多肽或者蛋白。
  用抗體作為噬菌體篩選的蛋白,從噬菌體展示的隨機(jī)多肽庫(kù)中,篩選出可以與抗體特異性結(jié)合的噬菌體,經(jīng)測(cè)序分析,獲得該抗體識(shí)別的抗原表位。該技術(shù)為抗原抗體反應(yīng)機(jī)制研究,診斷試劑開發(fā),疫苗制備等提供依據(jù)。
  目前的表位鑒定技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn):
  1.單抗藥物及診斷用單抗的制備;
  2.研制包括“通用”目標(biāo)在內(nèi)的治療性和預(yù)防性重組多價(jià)肽疫苗;
  3.研制單表位或重組多表位肽檢測(cè)抗原;
  4.篩選基于表位基序的疾病、腫瘤等新的特異診斷標(biāo)志物;
  5.高通量發(fā)現(xiàn)同源蛋白中全部保守性和特異性表位;
  6.篩選功能性抗體表位或者抗體中和性及可及性表位;
  7.為表位水平分析病毒遺傳進(jìn)化和變異,提供抗原漂移和轉(zhuǎn)移的直接證據(jù)。
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