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慢病毒構建原理

更新時間:2021-11-23點擊次數(shù):1560

慢病毒載體(Lentivirus)是一類改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒載體,是逆轉錄病毒的一種,基因組是RNA,其毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代,屬于假型病毒??衫媚孓D錄酶將外源基因整合到基因組中實現(xiàn)穩(wěn)定表達,具有感染分裂期與非分裂期細胞的特性。

◆慢病毒基因組進入細胞后,在細胞漿中反轉錄為DNA,形成DNA整合前復合體,進入細胞核后,DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉錄成mRNA,回到細胞漿中,表達目的蛋白;或產(chǎn)生小RNA。慢病毒介導的基因表達或小RNA干擾作用持續(xù)且穩(wěn)定,并隨細胞基因組的分裂而分裂。

◆慢病毒載體具有宿主范圍廣,基因容量大等特點。體外應用時,慢病毒載體能夠有效地感染培養(yǎng)的神經(jīng)元、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞、干細胞等多種類型原代細胞和大部分細胞系。由于慢病毒的感染具有整合特性,其能夠將外源基因有效地整合到宿主染色體上,因而可以達到持久性表達,從而構建穩(wěn)轉細胞株,用于基因的細胞功能研究。

◆體內(nèi)應用時,慢病毒載體的應用不如rAAV載體應用廣泛,因為其具有一定的免疫原性,且隨機整合特性可能導致細胞功能基因的異常。相比較腺相關病毒,慢病毒的擴散范圍較小,但其表達更快、基因容量更大(可容納4kb),可作為大容量基因的載體。


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