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做實驗不會制備細(xì)胞爬片怎么行?

更新時間:2021-12-01點擊次數(shù):1128

我們在做免疫熒光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(TUNEL)時,免不了要制備細(xì)胞爬片,爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實驗數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。今天,就教大家如何制備好的細(xì)胞爬片。



一. 實驗材料及試劑

蓋玻片、培養(yǎng)板、酒精燈、鑷子等;75%乙醇、DMEM*培養(yǎng)基(RPMI-1640*培養(yǎng)基)、胰酶等。

二、實驗內(nèi)容

爬片準(zhǔn)備:

1、24*24蓋玻片,剛好用于6孔板。也可用更大的蓋玻片,放在大的培養(yǎng)皿中爬片。

2. 蓋玻片泡酸過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再置于無水酒清中浸泡6小時,再用三蒸水沖洗3遍(個人認(rèn)為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,如果不干凈的話,細(xì)胞帖壁不好),放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒、烤干。

3.蓋玻片浸泡75%乙醇10分鐘消毒,然后酒精燈上烤干,直接放入培養(yǎng)皿,開始種細(xì)胞。重點是玻片是干凈的、無菌的。

4.蓋玻片在液體中經(jīng)常有貼壁吸附力,用一般鑷子很難一次性夾起,將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤,這樣將爬片輕輕勾起,用小鑷子取出就可以。

細(xì)胞進(jìn)行爬片:

1. 胰酶消化細(xì)胞后計數(shù)重懸細(xì)胞于*培養(yǎng)基中(懸浮細(xì)胞直接離心)。

2. 加細(xì)胞時,根據(jù)玻片的大小,先在每個孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細(xì)胞懸液時玻片漂起,造成雙層細(xì)胞貼片。整個過程注意無菌操作。

3. 根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

保存細(xì)胞爬片時,一般用培養(yǎng)皿或避光濕盒,先在皿底放一層面巾紙,然后再放爬片,這樣方便做實驗時取片。然后蓋上蓋子,并在蓋子上做標(biāo)記,為避免混淆。一般-20℃保存2-3月的片子去拍照沒有問題的。制備好的細(xì)胞爬片是不是很簡單呢?

三、注意事項

1. 使用細(xì)胞爬片時(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面積往往會比爬片面積多出一部分,加細(xì)胞懸液時常常就是細(xì)胞鋪滿整個孔底,有時細(xì)胞生長邊集現(xiàn)象,就是靠近壁邊緣密度要高些,這樣處于中央玻片上爬的細(xì)胞數(shù)量就可能相對較少)。比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內(nèi)后,加細(xì)胞懸液時只滴到玻片上,一直滴到液體布滿整個玻片又不會溢出玻片邊緣。

2. 按照實驗設(shè)計,作用一定時間后取玻片。注意細(xì)胞不能太密,否則容易掉片。


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