關(guān)于細(xì)菌表達(dá)——

由于其性質(zhì)，細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)是一種理想的蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)。它通常是生產(chǎn)重組蛋白和抗體的。到目前為止，許多細(xì)菌已經(jīng)被很好地研究。

在大量細(xì)菌中，大腸桿菌和枯草芽孢桿菌細(xì)胞系是**的重組蛋白表達(dá)宿主。它們?cè)谶m宜條件下以極低的成本快速?gòu)?fù)制，而表達(dá)水平高，這種特性使其成為大規(guī)模生產(chǎn)的有效和經(jīng)濟(jì)的方式。他們的基因組已*測(cè)序，遺傳背景和代謝途徑****。另外，由于結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，細(xì)菌比真核生物更容易轉(zhuǎn)染。這些期望的特征使表達(dá)過(guò)程更容易和更快速。

但在某些方面，優(yōu)勢(shì)也是不利的?？梢栽诩?xì)菌中容易地表達(dá)具有少量修飾的蛋白質(zhì)。雖然細(xì)菌中沒(méi)有細(xì)胞核，高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。這些結(jié)構(gòu)在細(xì)胞運(yùn)輸和翻譯后修飾（PTM）過(guò)程中是必需的。這導(dǎo)致不能產(chǎn)生具有細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)的膜結(jié)合蛋白，包括胰島素受體，血型糖蛋白，幾種酶等。由于在正確折疊中需要這種修飾，因此細(xì)菌中產(chǎn)生的蛋白質(zhì)通常是無(wú)活性的并且不起作用。就這些方面而言，真核表達(dá)系統(tǒng)更適合表達(dá)這些需要折疊，修飾和特殊結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，即使它比細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)更昂貴并且花費(fèi)更多時(shí)間。

每個(gè)表達(dá)系統(tǒng)都有其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，希望您在實(shí)驗(yàn)中，慎重選擇自己的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，取得滿意的結(jié)果。（蛋白表達(dá)系統(tǒng)有何區(qū)別，如何挑選？點(diǎn)此直達(dá)。）

大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)

圖1 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)簡(jiǎn)要流程圖

——巨大優(yōu)勢(shì)，供您選擇：

代謝途徑和基因表達(dá)的更清晰

通過(guò)全基因組測(cè)序；

成熟的基因克隆和表達(dá)系統(tǒng);

繁殖快，培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，遺傳穩(wěn)定。

生命周期短

大腸桿菌，可以在充足的營(yíng)養(yǎng)條件下每20-30分鐘繁殖一次;

具有成本效益的大規(guī)模發(fā)酵和巨大的生存潛力。

高水平的靶基因表達(dá)

表達(dá)水平高于正常的真核表達(dá)系統(tǒng)。它可以表達(dá)高達(dá)5％-30％外源基因的蛋白質(zhì)。

.遺傳背景明確

大腸桿菌的遺傳背景和生理特性非常清楚。有多種細(xì)菌菌株具有不同的耐藥性，營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變和抑制突變可供選擇。

抗污染能力強(qiáng)，后續(xù)實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，易控。

有許多現(xiàn)存表達(dá)載體可供選擇，它是FDA批準(zhǔn)的基因工程宿主菌株。

大腸桿菌表達(dá)成功案例

表達(dá)蛋白濃度測(cè)定

圖4 表達(dá)蛋白濃度測(cè)定曲線

結(jié)果總結(jié)：由上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以及濃度可知，表達(dá)蛋白水平高，穩(wěn)定，優(yōu)化條件成功。

枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)

——優(yōu)勢(shì)明確，大量表達(dá)蛋白

1. 細(xì)胞壁的組成簡(jiǎn)單，分泌的蛋白質(zhì)產(chǎn)品中不會(huì)混雜有細(xì)胞內(nèi)毒素

2. 能夠大量分泌胞外/目的蛋白，回收和純化都較為簡(jiǎn)單

3. 擁有一套高效的分泌信號(hào)肽及分子伴侶系統(tǒng)，可以完成目的蛋白的高效分泌表達(dá)，避免包涵體的形成

我司優(yōu)勢(shì)

1. 擁有多種枯草芽孢桿菌表達(dá)載體，如pHT101和pHT254.

2. 有多種不同的表達(dá)宿主，如胞內(nèi)表達(dá)的AS1、1012和168，分泌表達(dá)的WB800N等，可滿足客戶胞內(nèi)或者分泌表達(dá)的不同要求。

3. 可制備高效率的枯草芽孢桿菌感受態(tài)。

經(jīng)典案例

某流感病毒衣殼蛋白，大小100kD，客戶提供基因信息，經(jīng)優(yōu)化后構(gòu)建質(zhì)粒，表達(dá)圖譜如下：

圖5 枯草芽孢桿菌168及1012中蛋白質(zhì)的表達(dá)

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