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蛋白表達(dá)的收獲與儲存方法

更新時間:2024-11-26點(diǎn)擊次數(shù):306
  蛋白表達(dá)系統(tǒng),無論是原核生物(如大腸桿菌)還是真核生物(如酵母、昆蟲細(xì)胞或哺乳動物細(xì)胞),都需要適當(dāng)?shù)木S護(hù)保養(yǎng)以確保高效和穩(wěn)定的蛋白產(chǎn)量。以下是一些通用的維護(hù)保養(yǎng)方法:
 
  1.培養(yǎng)基與營養(yǎng)補(bǔ)充:確保使用適合宿主細(xì)胞生長的培養(yǎng)基,并根據(jù)需要添加抗生素、氨基酸、維生素或其他營養(yǎng)素。對于特定的蛋白表達(dá),可能需要優(yōu)化培養(yǎng)條件,如調(diào)整碳源、氮源比例或添加特定誘導(dǎo)劑。
 
  2.溫度控制:大多數(shù)細(xì)菌在37°C下生長良好,但某些蛋白質(zhì)可能需要低溫表達(dá)以減少包涵體的形成。真核細(xì)胞通常在30-37°C之間培養(yǎng),但具體溫度需根據(jù)細(xì)胞類型和表達(dá)系統(tǒng)調(diào)整。
 
  3.pH值調(diào)節(jié):維持適宜的pH值對細(xì)胞生長和蛋白質(zhì)穩(wěn)定性至關(guān)重要。通常,細(xì)菌培養(yǎng)的pH值應(yīng)保持在6.5-7.5,而真核細(xì)胞培養(yǎng)則更接近生理pH(7.2-7.4)。
 
  4.氧氣供應(yīng):充足的氧氣供應(yīng)對于好氧微生物和真核細(xì)胞的生長及蛋白質(zhì)合成非常重要。確保搖床速度或攪拌速率適當(dāng),以促進(jìn)空氣溶解。
 
  5.避免污染:無菌操作是防止外源微生物污染的關(guān)鍵。使用無菌技術(shù)處理所有試劑、容器和設(shè)備,定期檢查培養(yǎng)物是否有污染跡象。
 
  6.基因穩(wěn)定性維護(hù):對于重組蛋白表達(dá)系統(tǒng),保持質(zhì)?;虿《据d體的穩(wěn)定性很重要。避免不必要的傳代次數(shù),因?yàn)槊看蝹鞔伎赡茉黾油蛔兊娘L(fēng)險。
 
  7.誘導(dǎo)時機(jī)與強(qiáng)度:對于可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)(如lac啟動子控制的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)),選擇合適的誘導(dǎo)時機(jī)和濃度至關(guān)重要。
 
  8.收獲與儲存:在達(dá)到表達(dá)時間后及時收獲細(xì)胞,采用適當(dāng)?shù)姆椒?如離心、過濾)分離細(xì)胞與培養(yǎng)基。根據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)選擇合適的儲存條件,如冷凍、超濾濃縮或加入保護(hù)劑后凍干保存。
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