多克隆抗體制備是一個涉及多個步驟和精細(xì)操作的過程，其目的是通過免疫動物(通常是兔子或小鼠)來生成能夠識別特定抗原的多種抗體混合物。
 

　　一、抗原準(zhǔn)備
 

　　1.抗原的選擇與處理：抗原是能引起機體免疫反應(yīng)的物質(zhì)，具有抗原性和免疫原性?？乖ǔＰ枰?jīng)過純化，以確保其純度和特異性。對于半抗原，需要偶聯(lián)到大分子載體蛋白上，如BSA、OVA或HSA，以增強其免疫原性。
 

　　2.抗原的乳化：將抗原與佐劑按一定比例混合，并通過劇烈振蕩使其充分乳化。乳化過程至關(guān)重要，因為未乳化的抗原會影響免疫效果。
 

　　二、免疫動物
 

　　1.動物選擇：常用的免疫動物包括新西蘭大白兔、日本大耳白兔等。選擇健康、體重適中的動物，并確保它們在免疫前已適應(yīng)新環(huán)境。
 

　　2.免疫方案：根據(jù)抗原的性質(zhì)和所需抗體的量，制定合適的免疫方案。通常采用皮下或皮內(nèi)多點注射法，每隔一定時間(如2-4周)進(jìn)行一次免疫，共免疫數(shù)次(如4-5次)。
 

　　3.血清收集：在每次免疫后的一段時間內(nèi)(如7-10天)，通過心臟采血或頸動脈放血等方式收集血液。收集的血液需置于37℃烘箱中凝固，然后轉(zhuǎn)入4℃過夜，通過離心分離出血清。
 

　　三、多克隆抗體的檢測與純化
 

　　1.效價檢測：通過ELISA、WesternBlot等方法檢測抗血清的效價和特異性。效價達(dá)到一定水平后，即可進(jìn)行抗體的純化。
 

　　2.抗體純化：采用親和層析等方法對抗體進(jìn)行純化。例如，將抗原偶聯(lián)到CNBr-activatedSepharose4B上，制備成親和層析柱。然后將抗血清通過親和層析柱，使特異性抗體與抗原結(jié)合，再通過改變pH值或使用洗脫液將抗體從柱上洗脫下來。
 

　　3.抗體保存：純化后的抗體可以加入甘油等保護(hù)劑，分裝后儲存于-20℃或更低溫度下，以保持其活性和穩(wěn)定性。